隨著化妝品使用越來越廣泛。已成為人們日常生活中的必需品。開展化妝品衛(wèi)生質量監(jiān)測。是保障人民健康維護消費者的利益，如使用了細菌總數(shù)超標的化妝品。會導致皮膚感染 。因此，化妝品細菌總數(shù)測定是便于判明樣品被污染的程度。是對樣品進行衛(wèi)生學評價的重要依據(jù) 。

　　一、實驗原理

　　菌落總數(shù)是指化妝品檢樣經(jīng)過處理，并在一定條件下培養(yǎng)后，得到的1g或1ml檢樣中所含細菌菌落的總數(shù)。

　　菌落總數(shù)的測定（平板活菌計數(shù)法）是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的菌落（即由一個單細胞繁殖而成，且肉眼可見的子細胞群體）的生理及培養(yǎng)特征進行的。也就是說，一個菌落即代表一個單細胞。

　　測定時，首先將待測樣品制成均勻的、一系列不同稀釋度的稀釋液，并盡量使樣品中的微生物細胞分散，使之成為單個細胞狀態(tài)存在（否則1個菌落就不能代表1個菌）；再取一定稀釋倍數(shù)的一定量稀釋液接種到培養(yǎng)基上，使其均勻分布。菌落由單個細胞生長繁殖而成，因此通過統(tǒng)計菌落的數(shù)目，可計算樣品中的含菌數(shù)。

　　由于所計算出的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故不包括死菌，因此菌落總數(shù)的測定又稱為活菌計數(shù)。

　　菌落總數(shù)可作為判定食品被污染程度的標志，也可用于觀察細菌在食品中繁殖的動態(tài)，以便在對被檢樣品進行衛(wèi)生學評價時提供依據(jù)。

　　前邊所述的細菌菌落總數(shù)實際上僅為樣品中總細菌數(shù)的一部分，其余細菌皆因種種原因未能長出。每種細菌都有其一定的生理特性，欲將各種細菌都有培養(yǎng)出來，就必須創(chuàng)造各種不同的培養(yǎng)條件，包括營養(yǎng)、溫度、pH、需氧性等，去滿足各種細菌的要求。在實際工作中，不可能也不必要培養(yǎng)出所有的細菌，所得結果只是能在肉汁營養(yǎng)瓊脂上生長的嗜中溫需氧性的菌落總數(shù)。

　　二、儀器設備

　　（1）培養(yǎng)箱：（36±1）℃。

　　（2）恒溫水浴鍋：（46±1）℃。

　　（3）天平。

　　（4）滅菌廣口瓶或三角瓶：500ml。

　　（5）滅菌培養(yǎng)皿：皿底直徑9.0㎝。

　　（6）滅菌吸管：1.0㎝、10.1㎝。

　　（7）滅菌小試管。

　　（8）玻璃珠：直徑5㎜。

　　（9）均質機。

　　（10）滅菌刀、剪刀、鑷子。

　　（11）酒精燈。

　　三、培養(yǎng)基和試劑

　　營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

　　成分：

　　蛋白胨    10g    瓊脂    15～

　　牛肉膏    3g    蒸餾水

　　氯化鈉    5g    pH  7.2～

　　制法：將除瓊脂以外的各成分溶于蒸餾水中，用15%的NaOHt調節(jié)pH使之在7.2～7.4。加入瓊脂，于121℃下高壓滅菌

　　生理鹽水

　　成分：

　　蒸餾水

　　制法：一般每種檢樣配制250ml無菌生理鹽水。稱取2.2gNaCl,加入250ml蒸餾水溶解；分裝于2支大試管中，每支9ml;再量取225ml裝于500ml廣口瓶或三角瓶中，并加入適量的玻璃珠；剩余的裝入另1支試管中，包扎后于121℃下高壓滅菌15min。

　　﹪的酒精棉球。

　　四、實驗步驟

　　菌落總數(shù)的檢驗程序

　　檢樣

　　↓

　　制成幾個適當倍數(shù)的稀釋度

　　↓

　　選擇2～3個適宜的稀釋度，個取1ml加入滅菌培養(yǎng)皿

　　↓

　　每皿內各加入適量的營養(yǎng)瓊脂

　　±1)℃↓

　　菌落計數(shù)

　　↓

　　報告

　　菌落總數(shù)的檢驗程序

　　在無菌條件下，將25ml(或25g)檢樣剪碎，放入裝有225ml無菌生理鹽水和適量玻璃珠的500ml廣口瓶或三角瓶內，經(jīng)充分振搖，形成10-1均勻稀釋液。

　　用1ml的無菌吸管吸取10-1稀釋液1ml，注入裝有9ml無菌生理鹽水的試管內，振搖混合均勻，即為10-2稀釋液。再用此吸管吸取10-1稀釋液各1ml于2個培養(yǎng)皿內。

　　另取1ml的無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml，注入裝有 9ml無菌生理鹽水的試管內，振搖混合均勻，即為10-3稀釋液。再用此吸管吸取10-2稀釋液各1ml于2個培養(yǎng)皿內。

　　采用相同的方法吸取10-3稀釋液各1ml于2個培養(yǎng)皿內。

　　檢樣在36±1℃下48h后營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中細菌的菌落數(shù)。